Питательная среда для выделения энтерококков сухая (Энтерококкагар)

Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для выделения энтерококков сухая» (Энтерококкагар) предназначен для выделения энтерококков из клинического материала: отделяемое из ожоговых и хирургических ран, мочи, крови, фекалий и т.д.

Выделение энтерококков осуществляется микробиологическим методом. Принцип метода – визуальное обнаружение бактерий, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

Набор представляет собой смесь компонентов из расчета г/л: питательный агар сухой (СПА) - 35,0, экстракт кормовых дрожжей - 5,0, Д(+)-глюкоза - 10,0, сода кальценированная – 6,0, кристаллический фиолетовый - 0,001.

Питательная среда должна обеспечивать рост тест-штаммов Enterococcus faecalis liquefacilus 1379 и Enterococcus faecalis zymogenes 7(з) при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10 -6 через 20-24 часа инкубации при температуре 37 0 С в 3-х засеянных чашках в виде круглых, выпуклых колоний («S»-форма), диаметром 1-2 мм.

Питательная среда должна подавлять рост тест-штаммов Stapfylococcus aureus 209-P, Escherichia coli 3912/41 (055:К59), Proteus vulgaris НХ19 222 через 22 часа инкубации при температуре 37 0 С во всех засеянных чашках при посеве из разведения 10-1 по 0,1 мл микробной взвеси.

Упаковка: полиэтиленовые банки.

Срок годности: 2 года.

Цена дана с учетом НДС за 1кг.

Сухие питательные среды

Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон)
Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар)
Триптон-соевый агар сухой

Питательная среда для выделения сальмонелл и шигелл сухая (SS-агар)
Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (агар Плоскирева-ГРМ)

(RVS-бульон)
Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (Среда ЛЕВИНА-ГРМ)
Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (Агар ЭНДО-ГРМ)
Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (ВИСМУТ-СУЛЬФИТ-ГРМ агар)

Питательная среда для выделения и дифференциации E. coli 0157:Н7 и других энтеробактерий по признаку ферментации сорбита сухая (СОРБИТОЛ E.coli O157:H7 агар)
Питательная среда для обнаружения и выделения колиформных бактерий и кишечных патогенов сухая (Агар МАККОНКИ-ГРМ)
Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформных бактерий сухая (Бульон МАККОНКИ-ГРМ)

Питательная среда для селективного выделения и учета энтеробактерий сухая (Агар МОССЕЛЯ)

Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий сухая (Бульон МОССЕЛЯ)
Питательный агар для обнаружения и учета E.coli и колиформных бактерий сухой
(Лактозный ТТХ агар с тергитолом 7)
Хромогенная питательная среда для обнаружения колиформных бактерий и E. coli сухая (ХРОМАГАР)

Питательная среда для выделения и идентификации энтеробактерий сухая (SDS- бульон)
Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Среда ГИССА- ГРМ)
Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Агар КЛИГЛЕРА-ГРМ)
Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий сухая (ЖЕЛЕЗО-ГЛЮКОЗО-ЛАКТОЗНЫЙ агар с МОЧЕВИНОЙ)
Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий сухая (Среда РЕССЕЛЯ-ГРМ)
Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (АЦЕТАТНЫЙ агар)
Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации глюкозы сухая (Среда ЭЙКМАНА с глюкозой)
Питательная среда для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации лактозы сухая (Среда ЭЙКМАНА с лактозой)

Питательная среда для выявления клостридий по сульфитредуцирующему признаку сухая (СУЛЬФИТНЫЙ агар)

Питательная среда для выделения и культивирования кампилобактерий сухая (КАМПИЛОБАКАГАР)

Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза сухая (ИЕРСИНИЯ-агар)

Питательная среда для выделения коринебактерий сухая (КОРИНЕБАКАГАР)

Питательная среда для определения токсигенности дифтерийных микробов сухая (КОРИНЕТОКСАГАР)

Стрептококки - Hem Ltd

НОВИНКА.
Готовые питательные среды в чашках Петри производства ООО "Центральная Фабрика Готовых Сред" (ООО «ЦФГС»).
ООО «ЦФГС» – это первое в России высокотехнологичное предприятие по промышленному производству готовых микробиологических сред. соответствующее российским и международным стандартам ГОСТ Р ISO 14644-1-2002; ГОСТ ISO 9001-2011; ГОСТ ISO 13485:2003; NCCLS M22-A3.
Среды производятся в чистых помещениях из сырья ведущих мировых поставщиков BioRad, Lab M, Biolife, Sifin, Sigma-Aldrich, AppliChem, с добавлением высококачественной овечьей крови компании E&O Laboratories и проходят контроль качества на всех этапах производства.
Узнать больше о предлагаемом ассортименте, заказать продукцию или образцы питательных сред Вы можете по телефону 8- (495) - 787-04-32, 787-66-09 или на нашем сайте, пройдя по ссылке "Заказ образцов готовых сред" (в правой верхней части сайта).

ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ ПОЛОЖЕНИЕ
Стрептококки формируют род Streptococcus, относящийся к семейству Streptococcaceae из порядка Lactobacillales типа Firmicutes.
Подразделяются на пиогенные (Str. pyogenes, Str. agalactiae, Str. dysgalactiae, Str. equi и Str. canis), проявляющие в большинстве случаев бета-гемолиз (исключение составляют Str. dysgalactiae подвид dysgalactiae и стрептококки, близкие к зеленящему виду Str. anginosus), и на непиогенные (Str. mitis, Str. anginosus, Str. mutans, Str. salivarius и Str. bovis), являющиеся альфа-гемолитическими и негемолитическими (зеленящими).
Среди альфа-гемолитических видов отдельную группу составляет Str. pneumoniae, отличающийся от других зеленящих стрептококков по чувствительности к оптохину и растворимости в желчи. В группу Str. anginosus входят три вида – Str. anginosus, Str. constellatus и Str. intermedius.
Пиогенные (бета-гемолитические) стрептококки группируют по Лэнсфилд в соответствии со свойствами полисахаридных антигенов. Однако если группа В по Лэнсфилд ограничена лишь видом Str. agalactiae, то групповой полисахарид А по Лэнсфилд обнаруживают как у Str. pyogenes, так и у Str. dysgalactiae подвида equisimilis и Str. anginosus.
Фекальные стрептококки (E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum, E. avium, E. zymogenes, E. liquefaciens, E. durans и др.) выделены в отдельную группу – энтерококки.
КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
Неподвижны, спор не образуют, сферические или овоидные бактерии размером 0,5–2,0 мм. Каталазоотрицательны.

Комбинации с другими средами

Цена без НДС, руб.

Цена без НДС, евро

Кровяной агар с азидом (основа)

Селективная изоляция стрептококков и стафилококков, использовать с добавлением крови для определения гемолитической активности.

Кровяной агар с азидом и кристаллвиолетом (основа)

Селективная изоляция стрептококков, использовать с добавлением крови для определения гемолитической активности.

Сообщить о снижении цены

Оставить отзыв о продукции

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Стрептококки распространены повсеместно. Отдельные виды являются комменсалами и компонентами нормальной микрофлоры кожи. В то же время их инфекции могут проявляться в форме высоколетальных инвазивных болезней.
Наибольшее клиническое значение имеют стрептококки групп А (S. pyogenes) и В (S. agalactiae), а также зеленящие стрептококки (S. angimosus, S. mitis, S. sanguis, S. mutans, S. salivarius, S. vestibularis и др.).
S. pyogenes убиквитарен, колонизирует кожу и слизистые оболочки. Вызывает у людей скарлатину, фарингит, поражения кожи (иметиго, пиодермию, целлюлит, рожу), послеродовой сепсис, острую ревматическую лихорадку, септический эндокардит, острый гломерулонефрит, синдром токсического шока.
S. agalactiae колонизирует у людей носоглотку, пищеварительный тракт и влагалище. У женщин в отдельных случаях вызывает послеродовые осложнения, а у новорожденных детей часто становится причиной менингита, пневмонии и ряда других поражений, в 37% случаев приводящих к летальному исходу. У жвачных вызывает мастит.
S. pneumonia – один из основных возбудителей бактериальной пневмонии человека (наиболее чувствительны к нему дети и пожилые люди); у сельскохозяйственных животных помимо пневмонии вызывает мастит и артриты.
S. dysagalactiae вызывает мастит у коров.
S. equi – возбудитель мыта лошадей.
S. iniae вызывает у дельфинов сепсис и абсцессы.
Зеленящие стрептококки составляют 30–60% микрофлоры ротовой полости, а также значительную часть микрофлоры кишечника человека. Слабовирулентны, но способны вызывать бактериемию, абсцессы печени, головного мозга и других органов, артриты, эндокардит, кариес.
Стрептококки группы С колонизируют верхние дыхательные пути человека и животных, вызывая у последних септицемию, мастит и артрит.
Стрептококки группы G колонизируют верхние дыхательные пути собак и кошек, вызывая у них респираторные и кожные заболевания.
Стрептококки групп L и M вызывают у собак поражения мочеполовой системы.
Энтерококки (S. faecalis и S. faecium) являются одной из частых причин различных заболеваний урогенитального тракта, постхирургических гнойно-воспалительных процессов кишечника и брюшины, тяжелых пуэрперальных инфекций и инфекций новорожденных. Иногда их выделяют от пациентов с подострым эндокардитом.
ТЕСТИРУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
Отбирается в соответствии с данными анамнеза и результатами обследования пациента: мазки/смывы из носоглотки, прямой кишки, влагалища, очагов поражения кожи, биоптаты эндометрия, сердечных клапанов, спинно-мозговая и синовиальная жидкости, моча, аспират из придаточных пазух носа, кровь.
ПРИНЦИПИАЛЬНАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ
Бактериоскопия мазков проб: обнаружение грамположительных кокков, располагающихся одиночно, попарно или в цепочках. Неподвижны. Спор не образуют.
Посев материала на питательные среды и выделение чистой культуры: для первичной изоляции стрептококков из клинического материала пользуются преимущественно кровяным агаром, что позволяет дифференцировать изоляты по гемолитической активности, реже – сывороточным, сахарным агарами и другими универсальными средами. При исследовании проб, сильно контаминированных микроорганизмами, применяют селективные среды, а при подозрении на инфекцию стрептококка группы В материал перед посевом на кровяной агар инокулируют в специальную обогатительную среду (она может служить транспортной).
Бактериоскопия мазков культур: подтверждает принадлежность изолятов к роду Streptococcus и в ряде случаев служит основой для их первичной видовой идентификации.
Типирование: в реакции преципитации (по Лэнсфилд) и фенотипическими тестами (бацитрациновым, ПИР, гиппуратном, бета-глюкоронидазным, оптохиноновым, дезоксихолятным и Фогеса–Проскауера) проводят групповую идентификацию стрептококков). С той же целью можно применить колориметрический тест Strep Swift (см. раздел «Вспомогательные и диагностические средства, реагенты»), позволяющий дифференцировать стрептококки по наличию ферментов пироглютаматаминопептидазы, лейцинаминопептидазы и эскулиназы.
РОСТ НА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Большинство типичных колоний стрептококка группы А имеют округлую форму с ровным краем и диаметром 0,5–2 мм и более.
Существуют три типа колоний стрептококков – слизистые, матовые и блестящие. Слизистые колонии обычно более крупные по размеру, часто сливаются и выглядят, как капли воды. Такие колонии характерны для штаммов, продуцирующих большое количество гиалуроновой кислоты для построения капсулы. Матовые колонии, иногда называемые подслизистыми, часто – результат подсыхания слизистых колоний, плоские с неровной поверхностью. Блестящие колонии имеют меньший размер и куполообразны.
На кровяном фенилэтаноловом агаре стрептококки растут в виде мелких серовато-белых колоний.
На колумбийском CNA-агаре рост бета-гемолитических стрептококков может сопровождаться позеленением среды, что часто путают с альфа-гемолизом.
S. pyogenes на средах с глюкозой, сывороткой и кровью растет быстрее и образует более крупные колонии, чем на универсальных средах. На кровяном агаре индуцирует бета-гемолиз и формирует колонии 3 типов: а) крупные, блестящие, вязкие, напоминающие каплю воды; б) серые, матовые, зернистые с неровными краями; в) выпуклые, прозрачные диаметром 0,1–0,3 мм. На среде CLED образует мелкие серо-зеленые колонии. Рост на жидких средах имеет придонный характер. Размер зоны гемолиза вокруг колоний Str. pyogenes обычно превышает диаметр колонии в 2–4 раза.
На селективном стрептококковом агаре бактерия растет в виде прозрачных или мутных серовато-белых мелких колоний, окруженных зоной бета-гемолиза.
S. agalactiae в течение суток формирует на кровяном агаре выпуклые (изредка плоские) вариабельно прозрачные или сероватые, мелкие колонии (диаметром 0,5–1 мм), окруженные зоной бета-гемолиза (примерно 10% изолятов ее не дают – для выявления у них скрытой гемолитической активности применяют CAMP-тест). На средах без сыворотки и крови растет плохо. Рост на жидких средах сопровождается выпадением гранулярного осадка, среда остается прозрачной или равномерно мутнеет.
S. pneumonia лучше растет в атмосфере, содержащей 5% углекислого газа. Для культивирования пневмококков особенно подходят кровяные и сывороточные среды с 0,1% глюкозы. На кровяном агаре в аэробных условиях колонии окружает тонкая зеленоватая обесцвеченная зона альфа-гемолиза, в анаэробных условиях бактерия вызывает бета-гемолиз. На плотных средах колонии никогда не сливаются друг с другом. На плотных средах формирует нежные полупрозрачные четко очерченные мелкие (диаметром около 1 мм) колонии (иногда их центральная часть уплощена). На кровяном агаре мелкие плоские колонии не сливаются между собой и окружены зоной зеленящего гемолиза. На жидких средах дает равномерное помутнение и небольшой хлопьевидный осадок.
S. iniae на кровяном агаре образует мелкие колонии с темным центром и прозрачной периферией диаметром около 1 мм, окруженные зоной бета-гемолиза, переходящей на периферии в зону альфа-гемолиза.
Ангинозные стрептококки на плотных питательных средах формируют сравнительно мелкие колонии (<0,5 мм), в отличие от пиогенных стрептококков, формирующих более крупные колонии (>0,5 мм).
Зеленящие стрептококки на кровяном агаре обычно вызывают неполный альфа-гемолиз, но нередко он вообще отсутствует. При наличии в среде 6,5% хлорида натрия их рост прекращается.
Для Str. bovis и Str. salivarius типичны негемолитические серые колонии.
Энтерококки хорошо растут на универсальных средах в виде сероватых колоний диаметром 0,4–1 мм. На кровяном агаре чаще проявляют полный, реже – неполный гемолиз. В отличие от зеленящих стрептококков способны расти на средах с 6,5% хлорида натрия. Их колонии на m-энтерококковом агаре окрашены в розовый цвет, а на средах с эскулином колонии серые с черной короной. На цитрат-азидном карбонатном агаре с твином 80 E. faecalis формирует красные колонии среднего размера, рост других энтерококков частично подавлен, и они образуют мелкие колонии. На среде МакКонки № 2 колонии E. faecalis бесцветные или окрашены в красный цвет.
На селективном агаре с ванкомицином энтерококки вызывают почернение среды.

Отзывов на данный товар пока нет.

"ООО "ГЕМ" оставляет за собой право на изменение указанных цен без предварительного уведомления. Указанные цены не включают НДС, доставку, прочие налоги и сборы. Приведенные характеристики товаров, включая изображения, представлены исключительно для ознакомления и могут отличаться от реальных. Для получения более подробной информации, пожалуйста, обращайтесь к сотрудникам компании. Логотипы и торговые марки, использованные на сайте, являются собственностью их владельцев. Данный сайт не является средством массовой информации (СМИ). Вся представленная информация не является публичной офертой, предусмотренной ст. 437 Гражданского кодекса РФ"

• 1. Комплексное оснащение микробиологических и клинико-диагностических лабораторий "под ключ".
• 2. Широкий ассортимент продукции (более 3000 наименований, из них 1000 - всегда на складе).
• 3. Европейское качество продукции.
• 4. Эффективный логистический сервис.
• 5. Гибкая ценовая политика.
• 6. Квалифицированная информационная поддержка по продукции компании.
• 7. Обширная дилерская сеть.

Энтерококкагар, (250г

Питательная среда предназначена для выделения энтерококков из клинического материала (фекальных масс, мочи, мокроты и др.), воды, пищевых продуктов и других объектов.

Представляет собой гигроскопичный мелкодисперсный порошок кремового цвета.

ТУ 9398-110-78095326-2010. РУ № ФСР 2011 /10008.

Панкреатический гидролизаг казеина, дрожжевой экстракт, твин-80, глюкоза, калия фосфат однозамещенный, натрия карбонат, натрия азид, 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид кристаллический фиолетовый, агар.

? Препарат в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии питательной среды, тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, доводят до кипения и кипятят при постоянном перемешивании в течение 1 мин, охлаждают до температуры 45-50 o С и разливают в стерильные чашки Петри.

? Готовая питательная среда в чашках Петри прозрачная от розового до фиолетового цвета.

? Готовую среду, разлитую в чашки Петри, можно использовать в течение 5 суток при температуре хранения 2-8 o С (хранить чашки следует в темном месте).

Совокупность компонентов, входящих в состав питательной среды, обеспечивает выделение и дифференциацию энтерококков, а также ингибицию отдельных видов контаминантов.

? Исследования образцов проводятся по соответствующим Методическим указаниям и ГОСТам

? Инкубируют при температуре (37±1) o С в течение 24-48 ч.

Готовые к применению питательные среды

Компания «Витэк» предлагает готовые питательные среды для микробиологических анализов под торговой маркой Merckoplate® и Merckotube® производства компании «MerckKGaA» (Германия).

Merckoplate® — это более 60 наименований питательных сред (включая среды с нейтрализаторами), применяющихся в различных областях.

Merckotube® — это около 30 наименований готовых питательных сред, расфасованных в пробирки и бутылки.

Преимущества при работе с готовыми питательными средами Merckoplate®:

• удобство использования:
  • питательная среда в готовом к употреблению виде расфасована в стандартные чашки Петри;
  • нет необходимости в дополнительных приготовлениях среды;
  • необходимо просто добавить в среду инокулят, инкубировать и прочитать результат.
• экономичность — снижаются затраты труда, времени и материальных сред;
• быстрота — работа со средой длится не более 1 минуты.

Лактозныйагар с Тергитолом® 7 и ТТХ

Селективныйагар для энтерококков по Сланетцу и Бартли

Азидныйагар с желчью и эскулином

Дихлоран-глицериновый агар (ДГ-18)

Агар с карбонатом, азидом натрия, Твином® и цитратом (КАТЦ агар)

Селективный агар для псевдомонад (агар с цетримидом)

Селективный агар для стафилококов по Байрд-Паркеру (агарБайрд-Паркера)

BCYE — агар для легионелл

GVPC — селективный агар для легионелл

Элективныйагар для выделения Candida по Никерсону

Селективныйагар для патогенных грибов

Типовой I питательный агар

Типовой I питательный агар с нейтрализаторами

Агар для патогенных грибов по Киммигу

Селективный агар для дерматофитов по Тэплину

Агар с рисовым экстрактом

Маннитно-солевой агар с феноловым красным

Агар для учета общего числа бактерий

Агар с бромтимоловым синим, лактозой, цистином (Бролацинагар)

Агар Мюллера-Хинтона с кровью

Агар для учета общего числа бактерий

Агар с солодовым экстрактом

Агар с солодовым экстрактом с хлорамфениколом и гентамицином

Сахарозо-лактозныйагар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (БФЛС агар)

Дезоксихолат цитратный агар по Лифсону, модифицированный (агарЛифсона)

Ксилозо-лизин-дезоксихолатныйагар (КЛД агар)

Агар с глюкозой, кристалл виолетом и нейтральным красным по Мосселу (агарМоссела)

Агар для тестов на мутогенность

Агар для тестов на мутогенность

Казеин-соевыйтриптическийагар (KACO агар / Триптический соевый агар)

Казеин-соевый триптическийагар (KACO агар / Триптическийсоевыйагар) с нейтрализаторами

Казеин-соевыйтриптическийагар (KACO агар / Триптический соевый агар)

Казеин-соевый триптическийагар (KACO агар / Триптическийсоевыйагар) с нейтрализаторами

АгарСабуро (2% глюкозы)

АгарСабуро (4% глюкозы)

АгарСабуро (4% глюкозы) с нейтрализаторами

АгарСабуро (4% глюкозы) с нейтрализаторами

Селективный агар по Мосселу

Ксилозо-лизин-дезоксихолатныйагар(acc. harm. EP/USP/JP)

Преимущества при работе с питательными средами Merckotube®:

• удобство использования:
  • питательная среда в готовом к употреблению виде расфасована в пробирки или бутылки;
  • нет необходимости в приготовлении среды.
• экономичность — снижаются затраты труда, времени и материальных сред;
• быстрота — работа со средой длится не более 1 минуты.

МУК -11 Методы санитарно-микробиологического и санитарно-паразитологического анализа прибрежных вод морей в местах водопользования населения, МУК (Мет

4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы санитарно-микробиологического и санитарно-паразитологического анализа прибрежных вод морей в местах водопользования населения

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Управлением Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Краснодарскому краю (В.П.Клиндухов, П.Н.Николаевич); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае" (В.В.Пархоменко, Е.П.Лаврик, Л.И.Щербина) под редакцией ГОУ ВПО "Кубанский государственный университет" (Г.А.Лещева); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды" им. А.Н.Сысина Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (А.Е.Недачин, Т.З.Артемова, Е.К.Гипп, Р.А.Дмитриева, Т.В.Доскина, А.В.Загайнова, Н.Н.Буторина, В.А.Долгин, Т.Н.Максимкина); Федеральным государственным учреждением науки Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.М.Трухина, Н.Н.Мойсеенко); Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ГОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (В.П.Сергиев, А.И.Чернышенко, Г.И.Новосильцев, Е.А.Черникова, Н.А.Турбабина).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июля 2011 г.

3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 29 июля 2011 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее МУК) устанавливают методы санитарно-микробиологического и санитарно-паразитологического анализа качества прибрежных вод морей в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими требованиями к охране прибрежных вод морей от загрязнения в местах водопользования населения (СанПиН 2.1.5.2582-10 ).

1.2. Методические указания предназначены для индивидуальных предпринимателей, юридических лиц, деятельность которых может привести к загрязнению воды морей и оказать неблагоприятное влияние на здоровье населения, а также для органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор за качеством прибрежных вод морей.

1.3. Производственный контроль состава и свойств сточных вод и морской воды в контрольных пунктах охраняемых районов обеспечивается водопользователями самостоятельно, либо с привлечением аккредитованной на данный вид деятельности лаборатории.

1.4. Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ проб прибрежных вод морей осуществляется в соответствии с СанПиН 2.1.5.2582-10 по основным показателям: общие колиформные бактерии, Е. coli. энтерококки, стафилококки и колифаги; дополнительным показателям: возбудители кишечных инфекционных заболеваний (сальмонеллы и шигеллы), Pseudomonas aeruginosa, Legionella pneumophila. Campylobacter jejuni. вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита А); показателям, определяемым в период начала купального сезона, максимальной антропогенной нагрузки и по эпидемическим показаниям: жизнеспособные яйца гельминтов (аскарид, власоглавов, токсокар, фасциол), цисты патогенных кишечных простейших, ооцисты криптоспоридий.

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативно-методические документы:

1. СанПиН 2.1.5.2582-10 "Гигиенические требования к охране прибрежных вод морей от загрязнения в местах водопользования населения".

2. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

3. МУК 4.2.2316-08 "Методы контроля бактериологических питательных сред".

4. МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

5. МУК 4.2.2314-08 "Методы санитарно-паразитологического анализа воды".

6. МУК 4.2.2321-08 "Методы определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах".

7. МУК 4.2.2029-05 "Санитарно-вирусологический контроль водных объектов".

8. МУК 4.2.1884-04 "Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов".

9. МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации НК при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности".

10. МУ 2.1.4.1057-01 Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды".

11. ГОСТ Р 53415-2009 "Вода. Отбор проб для микробиологического анализа воды".

12. ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб".

13. ГОСТ 6709-72 "Вода дистиллированная. Технические условия".

14. ГОСТ 26670-91 "Методы культивирования микроорганизмов".

15. ГОСТ Р 52426-2005 "Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации".

16. МР 24 ФЦ/513. Определение колиформных бактерий и Е. coli с использованием хромогенных и флюорогенных индикаторных сред производства компании "Merck" (Германия)".

18. МР 96/225 "Контроль качества и безопасности минеральных вод по химическим и микробиологическим показателям".

19. МР 01/15702-8-34 "Микробиологическая диагностика кампилобактериоза. Методические рекомендации".

20. ПНД Ф 12.15.1-08 "Методические указания по отбору проб для анализа сточных вод".

1. Приборы для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и устройства для создания разрежения (0,5-1,0) атм. типа ПВФ-142, ОФФ-25, "ПробоКонг-СЭС-М3", ПВФ-142ВБ, ПМФ-70, АФ 142 "К", "Н".

2. Водяная баня или термостат для температурного режима 45-49 °С (для питательных сред).

3. Термостаты, поддерживающие рабочую температуру (37±1) °С, (44±0,5) °С, (50±1) °С.

4. Стерилизатор суховоздушный

5. Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 200 °С с ценой деления шкалы 1 °С.

6. Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 50 °С с ценой деления шкалы 0,5 °С

7. Логгеры (мониторинг температуры в термостате).

8. Термометр спиртовой с диапазоном измерения от -50 до 50 °С с ценой деления шкалы 1 °С для измерения температуры в холодильниках.

9. Стерилизатор паровой, режим работы от 0 до 2,5 кгс/см .

10. Ламинарный бокс для культуры клеток (класс не ниже 2).

11. Центрифуга лабораторная рефрижераторная WKH-1VH.

12. Микроцентрифуга для пробирок со скоростью вращения 10000-16000 об./мин.

13. Нагревательный прибор для варки питательных сред, либо магнитные мешалки с подогревом до 300 °С.

14. Микроскоп стереоскопический, обеспечивающий увеличение от 305 до 119х, с полем зрения 39-1,9 мм.

15. Инвертированный микроскоп для просмотра флаконов с культурами клеток при анализе на энтеровирусы.

16. Микроскоп биологический, обеспечивающий увеличение от 84х до 1350х.

17. Весы лабораторные общего назначения 4 класса точности, с пределом взвешивания до 1000 г, допустимая погрешность не более 0,1 г по ГОСТ 24104-80.

18. Микроскоп биологический, обеспечивающий увеличение от 84х до 1350.

19. Весы лабораторные общего назначения 4 класса точности, с пределом взвешивания до 200 г, допустимая погрешность не более 0,02 г.

20. РН-метр, обеспечивающий измерение с погрешностью до 0,01.

21. Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды, отвечающий ГОСТ 6709-72 .

22. СО инкубатор, обеспечивающий температуру до 50 °С.

23. Холодильники бытовые электрические с температурой в камере 4-6 °С.

24. Низкотемпературный морозильник с температурой в камере (-70 °С).

25. Иммуноферментный анализатор (ИФА).

26. Стерильный фильтрующий материал для микробиологических целей (мембранные фильтры, аналитические трековые мембраны и другие фильтрующие материалы с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм) проверенной ранее партии или другие фильтрующие мембраны с аналогичной способностью фильтрации, разрешенные к применению в установленном порядке.

27. Мембрана микропористая капроновая (ММК диаметр пор 0,2 мкм).

28. Мембрана для концентрирования вирусов из воды типа ФМНЦ-0,2 мкм.

29. Мембранные фильтры для паразитологических исследований с размерами пор 1,5-3,0 мкм, размерами пор 2,4-4,5 мкм, трековые микрофильтрационные мембраны с диаметром пор 1,0-3,05 мкм.

30. Трековые микрофильтрационные мембраны (ATM) с диаметром пор 5,0 и 2,5 мкм и префильтр (капроновая сетка) с диаметром пор 25,0 и 67-70 мкм для паразитологических исследований.

31. Облучатель бактерицидный.

32. Оптический стандарт мутности на 10 ед.

33. Часы сигнальные или песочные на 2, 3, 5 мин.

34. Макропористое стекло марки МПС 1000 ВГХ.

35. Набор для концентрирования с помощью пакетов с адсорбентом.

36. Ионообменная смола (Анионит АВ 17-8).

37. Набор для сбора и концентрирования вирусов из питьевой воды в системе децентрализованного хозяйственно-бытового водоснабжения, поверхностных и сточных вод.

38. Дозаторы пипеточные полуавтоматические переменного объема 0,5-10 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл с наконечниками.

39. Горелки газовые или спиртовки.

40. Петли бактериологические.

41. Пинцеты для работы с мембранными фильтрами.

42. Штативы для пробирок.

43. Емкости эмалированные.

44. Пробки различных размеров: силиконовые, резиновые и другие, выдерживающие стерилизацию сухим жаром и автоклавированием.

45. Вата хлопковая медицинская гигроскопическая.

46. Марля медицинская.

47. Маркеры водостойкие.

48. Резиновые перчатки.

50. Бумага плотная для упаковки посуды.

51. Штативы для пробирок 0,6 и 1,5 мл.

52. Планшеты пластиковые для культивирования культур тканей.

53. Батометр с устройством для закрепления стерильных емкостей.

54. Батометр специальный для отбора проб с разных глубин.

1. Для экспресс анализа индикаторных и патогенных микроорганизмов в воде может использоваться микробиологический анализатор "БакТрак-4300" в соответствии с МУК 4.2.1111-02 "Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды".

2. Для идентификации выделенных культур допускается применение автоматических микробиологических анализаторов (например, VITEK 2 Compact - Методические рекомендации N 02.032-08).

Лабораторная центрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М, ОС-6М со сменным ротором или другие марки с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-3000 об./мин, позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках объемом от 10 мл

Ареометры с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м ;

Световые микроскопы отечественные типа МИКМЕД-2 (вариант 2) и других фирм, оснащенные окулярами с увеличением 10х (дополнительно могут быть 7х и 5х), объективами 10х, 40х, 100х. Окуляр-микрометр и объект-микрометр;

Мембранные фильтры для фильтрования воды на основе ацетатов целлюлозы типа МФАС-СПА с размерами пор от 1,5 до 3,0 мкм, МФАС-СПА-4 с размерами пор от 2,5 до 4,5 мкм или прозрачные аналитические трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,0 до 5,0 и более мкм. Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мкм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования

Предфильтры - капроновая сетка с ячейками 60-70 мкм

Ёмкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания (широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100*
_________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

500 мл с притертым или завинчивающимися крышками, металлические или пластиковые канистры емкостью 10-25 л, стеклянные бутыли, фляги молочные металлические, эмалированные бидоны и др.;

Лабораторный вортекс, лабораторный ротатор;

Лотки эмалированные, металлические, эмалированные кастрюли, ведра;

Часы песочные на 3-5 мин, часы сигнальные или электронный таймер;

Кисти акварельные широкие (мягкие или полужесткие).

ЗОНА 1. Выделение ДНК/РНК из образцов

1. Ламинарный бокс (например, "БАВп-01-"Ламинар-С"-1,2", "Ламинарные системы", Россия, класс биологической безопасности II тип А).

2. Вортекс (например, "ТЭТА-2", "Биоком", Россия).

3. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, "Ленпипет", Россия).

4. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки объемом 1,5 мл (например, "Axygen", США).

5. Одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером до 200 мкл и до 1000 мкл (например, "Axygen", США).

6. Штативы для наконечников (например, "Axygen", США) и микропробирок объемом 1,5 мл (например, "ИнтерЛабСервис", Россия).

7. Холодильник от 2 до 8 °С.

8. Отдельный халат и одноразовые перчатки.

9. Ёмкость с дезинфицирующим раствором.

При использовании комплекта реагентов "РИБО-преп"

1. Термостат для пробирок типа "Эппендорф" от 25 до 100 °С (например, "ТЕРМО 24-15", "Биоком", Россия).

2. Микроцентрифуга для пробирок типа "Эппендорф" до 16 тыс. об./мин (например, "MiniSpin", "Eppendorf", Германия).

3. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, "ОМ-1", г. Ульяновск, Россия).

4. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, "Axygen", США).

При использовании комплекта реагентов "МАГНО-сорб"

1. Термостат для пробирок объемом 5 мл, диаметром 12 мм от 25 до 100 °С (например, "BioerTechnology", Китай )

2. Термостат для пробирок типа "Эппендорф" от 25 до 100 °С (например, "ТЕРМО 24-15", "Биоком", Россия).

3. Магнитный штатив для пробирок типа "Эппендорф" на 1,5 мл (например, "Promega", США).

4. Магнитный штатив для пробирок на 5 мл, диаметр 12 мм (например, "Promega", США).

5. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, "ОМ-1", г. Ульяновск, Россия).

6. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки объемом 1,5 мл (например, "Axygen", США).

7. Одноразовые полипропиленовые или полистирольные пробирки объемом до 5 мл диаметром 12 мм, круглодонные (например, "Axygen", США).

8. Одноразовые полипропиленовые крышки для пробирок объемом до 5 мл диаметром 12 мм (например, "Axygen", США)

9. Электронный или механический дозатор переменного объема с возможностью дозирования от 1000 до 5000 мкл (например, "Ленпипет", Россия)

10. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл, до 1000 мкл и до 5000 мкл (например, "Axygen", США).

ЗОНА 2. Проведение реакции обратной транскрипции, ПЦР и гибридизационно-флуоресцентной детекции продуктов ПЦР-амплификации

1. ПЦР-бокс (например, "БАВ-ПЦР-"Ламинар-С", "Ламинарные системы", Россия).

2. Вортекс (например, "ТЭТА-2", "Биоком", Россия).

3. Набор электронных или автоматических дозаторов переменного объема (например, "Ленпипет", Россия).

4. Одноразовые наконечники с аэрозольным барьером до 200 мкл (например, "Axygen", США).

5. Штативы для наконечников (например, "Axygen", США) и микропробирок на 0,5 (0,2) мл (например, "ИнтерЛабСервис", Россия).

6. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.

7. Отдельный халат и одноразовые перчатки.

8. Ёмкость с крышкой для дезинфицирующего раствора.

При использовании комплектов реагентов "ПЦР-комплект" вариант 100-FRT F, "ПЦР-комплект" вариант 50-FRT F

1. Амплификатор роторного типа, например, "Rotor-Gene" 3000 или 6000 ("CorbettResearch", Австралия) или амплификатор планшетного типа, например, "iQ5" ("BioRad", США), "Мх3000Р" ("Stratagene", США) или эквивалентные.

2. Одноразовые полипропиленовые пробирки для ПЦР:

а) на 0,2 мл (плоская крышка, нестрипованные) (например, "Axygen", США) для постановки в ротор на 36 пробирок - для приборов для ПЦР в реальном времени с детекцией через дно пробирки (например, "Rotor-Gene").

б) на 0,2 мл (куполообразная крышка) (например, "Axygen", США) - для приборов для ПЦР в реальном времени с детекцией через крышку (например, "iQ5", "Мх3000Р").

6.1. Общие требования

При выполнении микробиологического анализа следует отдавать предпочтение стандартизованным сухим питательным средам промышленного производства. При использовании промышленных сухих питательных сред следует соблюдать способ приготовления, применения и сроки хранения, указанные изготовителем.

Вновь приобретенная партия питательных сред должна пройти контроль качества в соответствии с МУК 4.2.2316-08 "Методы контроля бактериологических питательных сред".

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют дистиллированную воду, отвечающую требованиям ГОСТ 6709-72 .

Питательные среды готовят в посуде из инертного материала.

6.2. Растворы для разбавлений и питательные среды

6.2.1. Солевой (физиологический) раствор

В 1 л дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН=7,0±0,1. Разливают во флаконы, стерилизуют при температуре (120±2) °С 15 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

6.2.2. Пептонный раствор

В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 1 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН=7,0±0,1. Разливают во флаконы. Стерилизуют при температуре (120±2) °С 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

6.2.3. Пептонно-солевой раствор

В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 8,5 г хлорида натрия и 1 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН=7,0±0,1. Стерилизуют при температуре (120±2) °С 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

6.2.4. Питательный бульон

Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному производителем.

6.2.5. Питательный агар

Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

Питательный агар не допускается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

Питательный агар для определения колифагов прямым методом при посеве 20 мл пробы на чашку Петри готовят, увеличивая навеску сухого препарата на 10-15% от прописи. Разливают в емкости, автоклавируют при температуре (120±2) °С 20 мин.

Полужидкий питательный агар готовят с использованием одной трети навески сухого препарата, указанной на этикетке. Разливают в пробирки и автоклавируют при температуре (120±2) °С 20 мин.

Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры 45-49 °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Срок хранения питательного агара со стрептомицином не более 2 недель. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

6.2.6. Фуксин-сульфитная среда Эндо

Готовят из сухого препарата по способу, указанному производителем.

Готовую среду охлаждают до 60-70 °С и разливают в чашки Петри.

Если после застывания на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 3-5 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

6.2.7. Лактозный агар с тергитолом-7 и ТТХ

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Готовую среду охлаждают на водяной бане до 45-50 °С и добавляют приготовленного на стерильной дистиллированной воде 5 мл 0,05% водного раствора ТТХ на 100 мл основной среды. Хорошо перемешивают и разливают в чашки слоем не менее 5 мм. Раствор ТТХ и питательная среда устойчивы в течение недели при температуре 2-8 °С в защищенном от света месте.

6.2.8. Хромокульт колиформ агар

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Нагревают на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения в течение 35 мин. Не автоклавировать, не перегревать. Готовую среду охлаждают до 45-50 °С и разливают в чашки Петри. Питательная среда устойчива в течение 2-х недель при температуре 2-8 °С в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

6.2.9. Лактозо-пептонная среда

Растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы. После растворения ингредиентов и остывания среды до комнатной температуры добавляют индикатор (2 мл 1,6%-го спиртового раствора бромтимолового синего), устанавливают рН (7,4-7,6), разливают по 10 мл в пробирки.

Для приготовления концентрированной лактозопептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

Готовую среду стерилизуют при (112±2) °С 12 мин.

6.2.10. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа и образовывать индол

6.2.10.1 Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата

Готовят по способу, указанному производителем.

Срок хранения не более 2 недель при комнатной температуре. В холодильнике не хранить.

Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды "карманы" - потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

6.2.10.2. Жидкая лактозо-пептонная среда

Готовят в соответствии с п.6.2.9 с добавлением 1 мл 1,6%-го спиртового раствора бромтимолового синего на 1 л среды, разливают по 3-5 мл в пробирки с поплавком или комочком ваты.

Готовят по прописи производителя.

Примечание. При выборе среды для подтверждения ферментации углеводов целесообразно использовать полужидкие среды, которые позволяют улавливать небольшое количество газа и на ранних стадиях ферментации, что повышает чувствительность метода и скорость получения ответа через 4-6 ч.

6.2.10.4. Лактозный бульон с борной кислотой

Растворяют в 1 л дистиллированной воды: 10 г пептона; 12,2 г калия фосфорнокислого двузамещенного (безводного); 4,1 г калия фосфорно-кислого однозамещенного (безводного); 3,2 г борной кислоты; 5 г лактозы. После растворения всех ингредиентов при нагревании, среду остужают до комнатной температуры и разливают по 5 мл в пробирки с поплавками или комочками ваты, стерилизуют при (112±2) °С 12 мин. Срок хранения не более 2 недель.

Примечание. Каждую новую партию борной кислоты следует испытывать: при выращивании Е. coli при температуре 44 °С среда дает положительную реакцию - помутнение и газ.

6.2.10.5. Среда с триптофаном

10 г ферментативного пептона, 5 г хлористого натрия, 1 г триптофана растворяют в 1 л дистиллированной воды, устанавливают рН - 7,2, разливают в стерильные пробирки и автоклавируют при (120±2) °С в течение 20 мин.

6.2.11. Реактивы для оксидазного теста

Раствор 1%-й водный тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорида. Готовят перед употреблением.

Реактив N 1. Раствор 1%-й спиртовой -нафтола.

Реактив N 2. Раствор 1%-й водный диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: 1-й - до одного месяца, 2-й - до одной недели. Перед употреблением к 2,5 частям первого раствора добавляют 7,5 частей второго раствора.

Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).

Каждую новую партию и периодически раз в месяц реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens ) и отрицательную (Е. coli ) оксидазную реакцию.

Примечание: перечисленные реактивы являются канцерогенными. Работу по приготовлению реактивов следует выполнять в вытяжном шкафу, используя защитные перчатки и избегая контакта реактива с кожей.

6.2.12. Триптонный агар с желчью и Х-глюкуронидом

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Разливают в емкости, стерилизуют при температуре (120±2) °С 15 мин. Готовую среду охлаждают до 45-50 °С и разливают в чашки Петри. Питательная среда устойчива в течение 4-х недель при температуре 2-8 °С в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

6.2.13. Реактив Ковача

Растворяют 5 г пара-диметиламинобензальдегида в 75 мл амилового спирта на водяной бане при 60 °С. Затем медленно добавляют 25 мл концентрированной соляной кислоты. Приблизительно через 6 ч, после изменения цвета, реактив готов для употребления. Цвет готового реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого. При использовании некачественного амилового спирта реактив может приобрести темный цвет. Реактив следует хранить при температуре 4 °С в темном месте во флаконе из коричневого стекла. Срок хранения - две недели.

6.2.14. Щелочно-полимиксиновая среда (ЩЕС)

Растворы 1, 2 и 3 стерилизуют раздельно при 112 °С 12 мин. После стерилизации растворы смешивают, проверяют рН (10,0-10,2), прибавляют 20000 единиц полимиксина М, 0,5 мл 1,6%-го спиртового раствора бромтимолового синего, разливают в пробирки по 5 мл. В среду удвоенной концентрации добавляют 40000 единиц полимиксина М и 1 мл бромтимолового синего. Разливают в колбы или флаконы по 10, 50 и 100 мл соответственно количеству исследуемой воды.

6.2.15. Приготовление молочно-ингибиторной среды (МИС)

Готовят 2,5%-й мясо-пептонный агар. К 85 мл готового питательного агара, охлажденного до температуры 40-45 °С, добавляют 15 мл стерильного обезжиренного (0,5%-й жирности) молока, 1,25 мл 0,01%-го водного раствора кристаллического фиолетового, 1 мл 2%-го водного раствора теллурита калия. Все хорошо смешивают и разливают тонким слоем в чашки Петри.

6.2.16. Азидная среда Сланеца-Бертли

Сухой питательный агар промышленного производства готовят по указанию на этикетке, 4 г калия фосфорнокислого однозамещенного расплавляют при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 7,0, разливают мерно в емкости, стерилизуют при (120±2) °С 20 мин.

Перед употреблением в расплавленный и слегка остуженный агар добавляют из расчета на 100 мл среды: дрожжевого экстракта - 2,0 мл, глюкозы - 1,0 г, азида натрия - 0,04 г, 1%-го водного раствора 2,-3,-5-трифенилтетразолий хлорида (ТТХ) - 1 мл. Тщательно смешивают, разливают в чашки по 20-25 мл. Хранят в холодильнике не более 2 недель. Среду можно готовить перед употреблением без стерилизации в автоклаве.

6.2.17. Приготовление дрожжевого экстракта

Распределяют равномерно 1000 г прессованных (пекарских) дрожжей в 2000 мл дистиллированной воды, прогревают в автоклаве при 100 °С 30 мин, отстаивают в холодильнике 4-5 суток. Надосадочную жидкость разливают во флаконы по 50-100 мл, на каждые 100 мл экстракта прибавляют 1,25 мл 0,01%-го водного раствора кристаллического фиолетового, вновь прогревают при 100 °С 30 мин. Хранят экстракт в холодильнике.

Можно применять сухой дрожжевой экстракт промышленного производства, уменьшив концентрацию в 10 раз от указанного в прописях сред.

6.2.18. Питательная среда для выделения энтерококков сухая - энтерококкагар

Готовят по прописи завода-изготовителя.

Навеску тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, доводят до кипения и кипятят при постоянном помешивании в течение 1 минуты, быстро охлаждают до температуры 45-50 °С и разливают в чашки Петри. Минимальное время воздействия высокой температуры при приготовлении среды необходимо из-за наличия в среде ТТХ, который разлагается при нагревании.

6.2.19. Солевой агар с ТТХ для подтверждения наличия энтерококков

Сухой питательный агар по прописи производителя и 65 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды.

Осадок отфильтровывают, разливают мерно во флаконы, стерилизуют при (120±2) °С 20 мин. Перед употреблением в расплавленную основу из расчета на 100 мл добавляют: 1 г глюкозы, 2 мл дрожжевого экстракта или другого дрожжевого препарата, 1 мл водного 1%-го раствора ТТХ. Тщательно смешивают, разливают в чашки.

6.2.20. Желточно-солевой агар (ЖСА)

Сухой питательный агар по прописи производителя и 90 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды, разливают мерно в емкости, стерилизуют при (120±2) °С 20 мин. Перед употреблением в расплавленный и остуженный до 50-55 °С солевой агар прибавляют один стерильно приготовленный яичный желток, тщательно смешанный с 50 мл физиологического раствора с помощью стеклянных бус, перемешивают и разливают в чашки Петри тонким слоем по 12-15 мл для подтверждающего этапа или толстым слоем по 20-25 мл для выращивания на мембранных фильтрах.

Допускается использовать сухой препарат промышленного производства (стафилококкагар) как солевую основу с последующим добавлением желточной взвеси.

6.2.21. Среда Мюллера-Кауфмана

В 500 мл исследуемой воды вносят 25 мл 10%-го пептона, 0,5 г желчных солей, 5 г кальция углекислого, 15 г натрия тиосульфата, 0,5 мл 0,1%-го водного раствора бриллиантового зеленого, 10 мл раствора Люголя. Для приготовления раствора Люголя в 10 мл воды вносят 3 г йода кристаллического и 2,5 г калия йодистого.

6.2.22. Приготовление желчной соли по Олькеницкому

К 1000 мл желчи крупного рогатого скота прибавляют 40 г натрия гидрата окиси, гидролизуют в автоклаве при 120 °С 3 ч или 2 раза по 2 ч в эмалированной или стеклянной посуде, исключая алюминиевую. После охлаждения в гидролизат прибавляют 100 мл 20%-го водного раствора бария хлористого и прогревают в автоклаве при 100 °С 1 ч. Через 18-24 ч отстаивания надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К профильтрованному гидролизату прибавляют при постоянном помешивании 20%-й раствор соляной кислоты до кислой реакции (рН 6,4-6,6) и оставляют на 18-24 ч. Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают водой, прибавляют при нагревании 40%-ный раствор натрия гидрата окиси до слабо щелочной реакции (рН 7,2-7,4) и выливают на противень для подсушивания в сушильном шкафу при 115 °С до порошкообразного состояния. Из 1000 мл желчи можно получить 36 г смеси желчных солей. Следует остерегаться перещелачивания при последней операции. Хранят соли в темной банке с притертой пробкой.

6.2.23. Селенитовая среда Лейфсона

Готовят из сухого препарата промышленного производства по указанию на упаковке.

Для приготовления селенитового бульона двойной концентрации увеличивают навеску сухого препарата в два раза на тот же объем дистиллированной воды.

6.2.24. Магниевая среда

Приготовление среды обычной и двойной концентрации.

Готовят раздельно растворы А, Б, В по нижеследующей прописи:

Каждую навеску ингредиента вносят в исследуемый объем воды по одному после полного растворения предыдущего сразу после внесения.

Все навески можно заранее соединить в одной емкости в виде жидкой кашицы. Через 24 ч хранения при комнатной температуре происходит стерилизация концентрата. Дополнительная стерилизация не требуется.

6.2.25. Питательная среда для сальмонелл РСН

Готовая к применению, производства Ростов НИИ МИ Роспотребнадзора (г.Ростов-на-Дону).

6.2.26. Тетратионатная среда накопления по Preuss

К 1000 мл мясопептонного бульона добавляют 5 мл 0,1%-го водного раствора кристаллического фиолетового, стерилизуют при (112±2)° С 12 мин. После охлаждения добавляют 20 г тетратионата калия, устанавливают рН 6,5. Среду разливают в стерильные емкости размера, необходимого для последующего посева. Срок хранения - до одной недели при температуре 4 °С.

6.2.27. Висмут-сульфит агар

Готовят из сухого препарата промышленного производства по указанию на этикетке. Разливают в стерильные чашки Петри. Среду готовят заранее. До посева чашки со средой выдерживают в холодильнике не менее 24 ч.

6.2.28. Агар ЭМС (агар с эозиновым метиленовым синим)

Готовят из сухого препарата промышленного производства по прописи производителя.

6.2.29. Бактоагар Плоскирева с антибиотиками

Готовят из сухого препарата промышленного производства по прописи производителя.

6.2.30. Коммерческая среда ЕС-бульон (селективная) для обнаружения и определения количества бактерий Е. coli

Способ приготовления среды согласно прописи производителя.

6.2.31. Основа бульона для накопления кампилобактерий (Престона) HiMedia М 899 и (Дойла) HiMedia M 916

Используют готовую среду согласно прописи на этикетке. Растворяют сухую основу порошка в дистиллированной воде. При необходимости производят подогрев среды до кипения для полного растворения частиц. Стерилизация в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до температуры 45 °С.

Приготовление полной среды: перед использованием в 500 мл бульона асептически добавить 35 мл стерильной дефибринированной крови барана или древесный уголь, а также растворенное в этаноле содержимое 1 флакончика с добавкой антибиотиков модифицированной III (по Дойлу). Тщательно перемешать и разлить в соответствующие емкости в количествах, необходимых для проведения исследования.

6.2.32. Селективный агар Престона

Растворить основные компоненты в дистиллированной воде. При необходимости довести до кипения для полного растворения частиц. Установить рН 7,5±0,2 с помощью 0,1 н НСl или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. Остудить до 45-50 °С.

Приготовление полной среды: перед использованием в 1000 мл расплавленного и остуженного до 45-50 °С агара асептически добавить 70 мл стерильной дефибринированной крови барана; растворенное в 50%-м растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобактерий IV (по Престону) или I (по Блейзер-Вонг), или растворенное в 50%-м растворе этанола содержимое двух флакончиков с селективной ростовой добавкой для кампилобактерий, или 4 мл аэротолерантной добавки, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем 4-5 мм.

6.2.33. Питательная среда для культивирования кампилобактерий, сухая - кампилобакагар

40 г сухой среды размешать в 1 л дистиллированной воды, довести до кипения и кипятить 2-3 мин до полного растворения. Среду разлить по 400 мл в колбы и стерилизовать автоклавированием 20 мин при 121 °С. В остуженную до 50-55 °С питательную основу среды вносят FBP-добавки и 20 мл бараньей или донорской крови и разливают в чашки Петри по 15-20 мл. Для придания среде селективных свойств используют селективные смеси.

Добавки для повышения аэротолерантности (FBP-добавки)

1. FBP-добавки: указанное количество добавок рассчитано на 1 л питательной среды.

Железа сульфат II

Натрий сернисто-кислый пиро(метабисульфит)

Натрий пировиноградно-кислый (пируват)

Навески солей внести в сухую стерильную пробирку, добавить 5 мл стерильной дистиллированной воды, периодически встряхивать в течение 15-20 мин. Приготовленный раствор имеет оливковый цвет, не подлежит хранению и должен быть использован в день приготовления.

2. Прописи селективных добавок к питательным средам.

После растворения всех ингредиентов на водяной бане или автоклаве разлить в пробирки высотой столбика 6 см (независимо от диаметра пробирки), стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин, остудить столбиком.

6.2.39. Тест Грегерсена

Простой, быстрый способ, заменяющий окраску по Граму и не требующий оптики.

В капле 3% водного раствора KОН на предметном стекле эмульгируют бактериальную массу, взятую с плотной среды. После нескольких секунд перемешивания петлей взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность испытуемой культуры или колонии к грамотрицательному виду бактерий. У грамположительных бактерий, за редкими исключениями, реакция отрицательна.

Набор для выделения РНК, например, типа "Рибозоль".

Тест-система для определения РНК энтеровирусов.

Тест-система для определения РНК вируса гепатита А.

6.2.41. Тест-культуры микроорганизмов

Контрольный колифаг MS-2, штамм ВКПМ РН 1505, штамм ВКПМ-3254 Escherichia coli K12F+Str-r, Escherichia coli штамм 675, Staphylococcus aureus штамм 906 и один из штаммов: Pseudomonas aeruginosae 10145 АТСС или Pseudomonas fluorescens 948 АТСС, тест-штамм Campylobacter jejuni.

Комплекс выполняемых лабораторией мероприятий и процедур, направленных на обеспечение и контроль стабильности требуемых условий роста микроорганизмов, ведения эталонных бактериальных культур, а также предупреждения неблагоприятного воздействия факторов, возникающих в процессе выполнения анализа и оценки его результатов, изложены в МУ 2.1.4.1057-01 "Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологического исследования воды".

Посуда, применяемая для микробиологического анализа (пробирки, колбы, флаконы), должна быть удобной конструкции, использоваться должным образом и проходить соответствующую подготовку, чтобы гарантировать и чистоту, и стерильность.

После окончания анализа использованную лабораторную посуду с содержимым обеззараживают автоклавированием при температуре (126±2) °С (0,15 МПа) в течение 60 мин с момента достижения указанной температуры в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 .

После автоклавирования лабораторную посуду многократного применения моют с использованием моющих средств, не содержащих фосфаты, после чего тщательно промывают проточной водопроводной водой до полного удаления моющего средства, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

Использованные пипетки погружают в рабочий раствор дезинфекционного средства. Через 30-60 мин после обеззараживания пипетки тщательно промывают проточной водопроводной водой до полного удаления дезинфицирующего средства, после чего промывают дистиллированной водой и высушивают.

После высушивания чашки Петри, пробирки, пипетки укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации.

Лабораторная посуда для вирусологических исследований должна быть химически чистой, хорошо обезжирена, тщательно вымыта до полного удаления моющих средств и других посторонних примесей, высушена и простерилизована.

Стерилизацию посуды сухим жаром проводят в суховоздушном шкафу одним из способов:

- при температуре (180±3) °С в течение 1 ч с момента достижения указанной температуры;

- при температуре (160±5) °С в течение 2,5 ч с момента достижения указанной температуры.

Стерилизацию посуды в автоклаве осуществляют:

- при температуре (126±1) °С (0,15) МПа в течение (10±1) мин с момента достижения указанной температуры;

- при температуре (120±2) °С (0,11) МПа в течение (45±3) мин с момента достижения указанной температуры.

После окончания стерилизации посуда маркируется с указанием даты стерилизации. Срок хранения стерильной посуды (чашки Петри, пробирки, пипетки), укупоренной в бумагу или металлические пеналы, составляет не более 30 дней.

Подготовка, стерилизация, материалы для изготовления емкостей приведены в ГОСТ Р 53415-2009. Вся посуда для отбора проб на санитарно-бактериологические и вирусологические исследования должна быть стерильной и изготовлена из материалов, не влияющих на жизнедеятельность, и не оказывающих инактивирующего действия на микроорганизмы и обеспечивающих неизменность состава пробы.

При отборе проб воды для бактериологических исследований используют чистые стерильные бутыли из стекла для многократного применения или из полимерного материала как одноразовые.

Горловины бутылей должны быть укомплектованы плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми, пластмассовыми, закрывающиеся нажатием или завинчивающимися крышками), защищены снаружи от загрязнений колпачками из алюминиевой фольги или плотной бумаги, которые не должны разрушаться при стерилизации.

Не допускается применение ватных пробок, так как при длительном воздействии высоких температур в условиях стерилизации вата может выделять токсичные вещества, влияющие на результаты анализа.

Для отбора проб путем погружения в чистые воды используют бутыли, которые должны быть стерильными как внутри, так и снаружи, и защищены от загрязнений при хранении после стерилизации, например, упакованы в плотную бумагу.

Вместимость бутыли для отбора проб должна соответствовать объему воды, необходимому для определения всех требуемых микробиологических показателей:

- для определения 4-5 индикаторных микроорганизмов - не менее 500 см ;

- индикаторных и патогенных микроорганизмов (сальмонелл) - не менее 1500 см ;

- для определения Campilobacter от 1000 см и более.

- для определения вирусов - от 5000-10000 см .

Стерилизацию емкостей проводят по п.8.1.

При автоклавировании завинчивающиеся крышки не закручивают до конца, чтобы обеспечить замещение воздуха в бутыли паром во время повышения температуры. После стерилизации бутыли плотно закрывают завинчивающимися крышками.

Простерилизованные бутыли должны иметь маркировку с указанием даты стерилизации для последующего учета установленного срока хранения. Срок хранения стерильной посуды для отбора проб не более 30 дней в закрытом шкафу.

Отбор проб воды для паразитологических исследований производят в специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости однократного применения. Посуда (емкости) для многократного использования должна быть изготовлена из материалов, выдерживающих обработку кипячением или дезинфицирующими средствами.

Емкости для паразитологического исследования (сосуды больших объемов - молочные фляги, металлические, пластмассовые ведра) должны быть чистые, тщательно промытые кипяченой водой. Перед отбором проб емкости ополаскивают отбираемой для анализа водой.

При отборе проб воды, подвергнутой обеззараживанию химическими реагентами, необходимо проводить нейтрализацию дезинфектанта по ГОСТ Р 53415-2009. Для нейтрализации остаточного количества хлорсодержащих дезинфектантов в емкость, предназначенную для отбора проб, вносят до стерилизации натрий серноватисто-кислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды.

Отбор проб осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ Р 51592-2000 и ГОСТ Р 53415-2009 .

Отбор проб морской воды производят специалисты после прохождения инструктажа по технике выполнения отбора проб. Процедура обучения и определения компетентности персонала, отбирающего пробы, должна быть документально оформлена.

Отбор проб проводят с использованием различных плавучих средств, мостов, помостов и других приспособлений в местах, где глубина водоема не менее 1-1,5 м. Не допускается проводить отбор проб с берега.

При отборе проб с плавучих средств (корабля, лодки, судна и т.п.) пробы воды следует отбирать с подветренного борта; со стоящего на якоре плавучего средства - с носа.

Поверхностные пробы отбирают с глубины 10-30 см от поверхности воды или от нижней кромки льда. Придонные пробы отбирают с глубины 30-50 см от дна.